農(nóng)藥殘留檢測(cè)相關(guān)知識(shí)

一、農(nóng)藥分類
農(nóng)藥是用于防治危害農(nóng)作物及農(nóng)副產(chǎn)品的病蟲害、雜草及其他有害生物的化學(xué)藥劑的統(tǒng)稱。其分類方法有多種，常見的幾種分類如下：
1、根據(jù)防治對(duì)象的不同，分為殺蟲劑、 螨劑、殺菌劑、除草劑、殺鼠劑等。常將防治害蟲的稱為殺蟲劑，防治紅蜘蛛的稱為殺螨劑，防治作物真菌、細(xì)菌及病毒的稱為殺菌劑，防治雜草的稱為除草劑，防治鼠類的稱為殺鼠劑。
2、根據(jù)農(nóng)藥的作用方式分為胃毒劑、觸殺劑、熏蒸劑、內(nèi)吸劑、引誘劑、驅(qū)避劑、拒食
劑、不育劑等。
3、根據(jù)農(nóng)藥的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)可分為有機(jī)農(nóng)藥和無(wú)機(jī)農(nóng)藥兩大類。農(nóng)藥中除少部分的無(wú)機(jī)物外，大部分都為有機(jī)化合物，其中有元素有機(jī)化合物、金屬有機(jī)化合物及一般有機(jī)化合物之分。我們所測(cè)試的有機(jī)磷屬于元素有機(jī)化合物之類。
另外還有根據(jù)農(nóng)藥的來(lái)源、農(nóng)藥的使用方法、防治原理等來(lái)分類。
二、生化分析適用于什么農(nóng)藥
絕大多數(shù)化學(xué)農(nóng)藥之所以能殺蟲、螨、或者有效的主要原因就在于它們對(duì)生物內(nèi)的酶有不同程度的抑制作用。因此，利用生化分析測(cè)試的農(nóng)藥應(yīng)該是生物體內(nèi)某種酶的抑制劑(激活
劑)，使得這些酶失去正常的生理作用，從而使生物表現(xiàn)出中毒的癥狀。當(dāng)然，基于目前的研究水平，有些農(nóng)藥雖然知道它對(duì)某種酶有不利的影響，但是該酶的提取，保存等因素的原因也制約著用生化方法來(lái)測(cè)試該種農(nóng)藥。所以雖然生物體內(nèi)酶的種類很多，化學(xué)農(nóng)藥作用原理也大多基于對(duì)生物體內(nèi)酶的作用，但利用生化分析進(jìn)行測(cè)試的農(nóng)藥種類并不多。

三、測(cè)試農(nóng)藥殘留有哪些方法
農(nóng)藥殘留的測(cè)試方法，總的來(lái)說(shuō)可以分為常規(guī)測(cè)試方法和速測(cè)方法。常規(guī)的測(cè)試方法有氣相色譜、凝膠色譜及薄層色譜法。這些方法都是利用農(nóng)藥在不同載體中的分配系數(shù)不同而得到分離，從而定性和定量來(lái)測(cè)試農(nóng)藥的種類及含量。速測(cè)方法主要有速測(cè)卡法和酶抑制率法(又稱分光光度法)兩種。無(wú)論是速測(cè)卡法還是酶抑制率法，其都是利用酶活性被抑制原理。

四、乙酰膽堿酯酶對(duì)乙酰膽堿的作用原理
乙酰膽堿酯酶和乙酰膽堿作用時(shí)，首先形成一個(gè)酶底物的絡(luò)合物，接著乙酰膽堿上的�；�轉(zhuǎn)移到酶分子上,形成乙酰化酯酶。乙�；�酯酶很不穩(wěn)定，極易水解，其半衰期約為0.1毫秒。乙�；�酯酶水解后又釋放出酶分子，從而使酶復(fù)活，再循環(huán)利用。

五、有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制過(guò)程，什么是可逆抑制
有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥是乙酰膽堿酯酶的底物膽堿酯的結(jié)構(gòu)類似物。它們同乙酰膽堿酯酶作用時(shí)，首先形成非共價(jià)的中間復(fù)合物，然后被水解，水解的同時(shí)，磷�；�與膽堿酯酶活性中心絲氨酸羥基作用生成以共價(jià)結(jié)合的磷�；�酶。磷�；�酶中的磷酰化基很難水解，所以磷�；�酶很穩(wěn)定，其穩(wěn)定性是乙酰化酶的107倍以上。因此，可以說(shuō)有機(jī)磷對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的。不可逆抑制是指抑制劑與酶分子上的某些基團(tuán)以牢固的共價(jià)鍵結(jié)合使酶失活，它的特點(diǎn)是隨時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)逐漸的增加抑制，最后達(dá)到完全抑制。而可逆抑制是指抑制劑與酶分子結(jié)合是可逆的，不會(huì)產(chǎn)生不可逆的共價(jià)修飾等作用。

六、米氏常數(shù)的含義
米氏常數(shù)km表示酶與底物的復(fù)合物的離解常數(shù)，每一種酶對(duì)于特定的底物，都有自己特定的km。1/km稱為酶與底物結(jié)合的親和常數(shù)。米氏常數(shù)也可以定量為在一定的酶濃度下，酶觸反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)底物的濃度。

七、預(yù)反應(yīng)過(guò)程中，影響農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率的因素
農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率的大小主要取決于農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)。當(dāng)農(nóng)藥分子中含有起作用的強(qiáng)吸電子基團(tuán)時(shí)，磷�；�與乙酰膽堿酯酶的絲氨酸羥基就愈容易結(jié)合，在一定時(shí)間內(nèi)，抑制率就愈大。當(dāng)然，對(duì)于一定的農(nóng)藥，在預(yù)反應(yīng)中，抑制環(huán)境溫度和抑制時(shí)間及農(nóng)藥濃度等都是影響抑制率大小的因素。所以在預(yù)反應(yīng)中，應(yīng)盡可能地保證環(huán)境溫度、抑制時(shí)間以及農(nóng)藥濃度的一致。有些農(nóng)藥剛配制好時(shí)測(cè)試的抑制率較大，幾天后同樣農(nóng)藥同樣條件再測(cè)試時(shí)可能抑制率又降低，這就是因?yàn)椴糠洲r(nóng)藥已經(jīng)降解，起不到抑制作用所致。

八、預(yù)反應(yīng)結(jié)束后，影響抑制率測(cè)定的因素
酶抑制率法測(cè)試農(nóng)藥殘留的過(guò)程中，預(yù)反應(yīng)完成后，再加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。測(cè)試根據(jù)體系中顏色變化的情況來(lái)決定抑制率的大小。所以在測(cè)試一批待測(cè)樣時(shí)，加入底物和上機(jī)測(cè)試的過(guò)程應(yīng)盡量快，且加入底物的量一定要一致，也不得有任何溶液的損失，否則測(cè)出的數(shù)據(jù)時(shí)不可靠的。

九、試樣提取中應(yīng)該注意些什么
有些果蔬如蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等中含有對(duì)酶有影響的植物次生質(zhì)，有些蔬菜中葉綠素的含量太高，影響比色反應(yīng)。所以對(duì)于以上種類的果蔬，應(yīng)盡可能的采取整株(體)浸提的辦法來(lái)消除干擾。另外，由于同一株(個(gè))待測(cè)樣品，其不同部位的農(nóng)藥含量不同，因此，進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試時(shí)，最好為同一個(gè)待測(cè)液的不同次數(shù)測(cè)定，否則可能會(huì)出現(xiàn)因取樣不同出現(xiàn)重現(xiàn)性不好的情況。

十、藥劑應(yīng)怎樣保存
酶抑制率測(cè)試法所用的試劑大多為生化試劑，因此它們的保存條件較為苛刻。對(duì)于粉劑化的酶及底物應(yīng)保存在-20℃環(huán)境中。對(duì)于已經(jīng)配制成溶液的藥劑如酶液、底物溶液、顯色劑溶液等應(yīng)置于0-4℃環(huán)境中保存。而浸提劑無(wú)論配制成溶液與否，在常下密封保存即可。 十一、國(guó)家對(duì)農(nóng)藥殘留速測(cè)有哪些指標(biāo)，其測(cè)試方法有哪幾類
目前國(guó)家對(duì)農(nóng)藥殘留速測(cè)出臺(tái)的標(biāo)準(zhǔn)有《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》和《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)試結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)及以及常見農(nóng)藥如甲胺磷、氧化樂(lè)果、克百威、敵敵畏等農(nóng)藥的最低檢出限。不同的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)所用酶的種類及方法，規(guī)定的各種農(nóng)藥的檢出限量和判斷標(biāo)準(zhǔn)也不同。例如，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)判斷依據(jù)為抑制率大于70%時(shí)不合格，而國(guó)標(biāo)有規(guī)定抑制率大于50%為不合格，也有規(guī)定吸光度值大于0.9為不合
格。兩種標(biāo)準(zhǔn)所使用的方法都是利用酶被農(nóng)藥抑制，活性降低原理。其中國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，有使用乙酰膽堿酯酶，也有使用植物酯酶—面粉酶，而行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)則使用的是丁酰膽堿酯酶。