您現(xiàn)在的位置:中國農(nóng)業(yè)儀器網(wǎng) > 技術(shù)文章 > 凱氏定氮儀檢測食品蛋白質(zhì)含量實驗報告
凱氏定氮儀檢測食品蛋白質(zhì)含量實驗報告
凱氏定氮儀檢測法是測定食品中蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法,測定結(jié)果穩(wěn)定,準確。但操作煩瑣,樣品消化費時費事,消化時排放的SO2直接危害操作人員的身體健康。而全自動蛋白質(zhì)分析儀價格昂貴,目前尚難普及。本文用KDY-04(A)定氮儀對食品中蛋白質(zhì)含量進行測定,結(jié)果與經(jīng)典凱氏定氮法差異無統(tǒng)計學(xué)意義,且操作簡便,結(jié)果準確,分析速度快,消除了空氣污染,可用于批量樣品中蛋白質(zhì)的測定。
1 材料與方法
1·1 儀器與試劑 KDY-04(A)定氮儀;樣品裝置:4孔消化器;鹽酸標準溶液:c(HCI)=0·0500mol/L;硫酸(ρ20=1·84g/ml);氫氧化鈉溶液(400g/L);硼酸溶液(20g/L);指示液:1份甲基紅乙醇溶液(1g/L)和5份溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L),臨用時混合;催化劑:硒粉或硫酸鉀+硫酸銅(10+1);過氧化氫(30%)。
1·2 測定方法
1·2·1 樣品消解 準確稱取0·5~2·0g混勻固體樣品或吸取5·0~10·0ml液體樣品于干凈的消化管內(nèi),加0·5~1·0g硒粉或10g硫酸鉀+1g硫酸銅,10ml硫酸,搖勻,加10ml過氧化氫,混勻,將消化管放入消化器,放上裝好密封圈的排污管,打開抽氣三通進水,使抽氣三通處于吸汽狀態(tài)。接通電源,進行消化,如遇難消化的奶粉等樣品,可于消化過程中適當增加過氧化氫的加入量,至消化液呈透明藍綠色液體,關(guān)閉電源,冷卻,定容至100ml。此過程約需1~2h。
1·2·2 測定 打開電源,按儀器說明書調(diào)試儀器進入待機狀態(tài)(約0·5min)。把裝有50ml硼酸溶液及2~3滴指示液的三角瓶放到接收托盤上,接收管插入液面,再將內(nèi)裝適量消化樣品的消化管放到蒸餾器上,加20ml純水及消化時硫酸5倍量的氫氧化鈉液,打開蒸汽開關(guān)進行蒸餾。當流出液至150ml左右時下移接收瓶,使接收管脫離液面,用純水沖洗接收管,繼續(xù)蒸餾0·5min,結(jié)束。取下消化管,關(guān)掉蒸汽開關(guān),儀器還原到待機狀態(tài)。餾出液用0·0500mol/L的鹽酸標準溶液滴定至淡紫色為終點,計算蛋白質(zhì)含量。同時做試劑空白實驗。
2 定氮儀檢測實驗結(jié)果
2·1 方法對比 分別用經(jīng)典的凱氏定氮法和KDY-04(A)定氮儀測定不同種類樣品的蛋白質(zhì)含量。2種方法對同一樣品的測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0·361,P>0·05)。(表1)。2·2 精密度測定取蛋白質(zhì)含量不同的樣品,每一種樣品平行測定6次,結(jié)果見表2。測定結(jié)果的相對標準偏差(RSD)均<2%。2·3 準確度測定 取蛋白質(zhì)含量不同的樣品,加入一定量的硫酸銨標準物進行加標回收試驗,經(jīng)測定回收率為97·6%~101·9%。(表3)。3 討論經(jīng)典的凱氏定氮法測定蛋白質(zhì),裝置復(fù)雜,程序繁瑣,消化時間長,對環(huán)境污染較大,蒸餾過程較難控制,易發(fā)生倒吸現(xiàn)象而致實驗失敗。而用KDY-04(A)定氮儀測定蛋白質(zhì)則克服了以上的不足,采用封閉消化,樣品不易受污染,也消除了環(huán)境污染;一次可消化多個樣品;不會出現(xiàn)蒸餾倒吸現(xiàn)象,提高了工作效率。消化過程中加入適量的過氧化氫,使反應(yīng)更加充分、快速,消化更徹底。且儀器價格相對便宜,適于基層單位應(yīng)用?梢晿悠分械鞍踪|(zhì)含量高低,適當增減取樣量或測定樣品體積。無催化劑硒粉時,可使用硫酸銅和硫酸鉀作催化劑。
實驗結(jié)果表明,KDY-04(A)定氮儀測定蛋白質(zhì),測定結(jié)果與經(jīng)典的凱氏定氮法基本一致,經(jīng)t檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0·361,P>0·05)。該法分析速度快,操作簡便,消除了空氣污染,適用于批量樣品中蛋白質(zhì)的測定。
- 【中國農(nóng)業(yè)儀器網(wǎng)】聲明部分文章轉(zhuǎn)載自其它媒體,轉(zhuǎn)載目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),且不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)和其它問題,請在30日內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系。